背景介绍

人的身体依靠血液的凝结来阻止受伤后的出血并帮助康复。正常的血液凝结可以在受外伤后防止瘀血，而且可以阻止日常生活中轻微伤害所引起的出血深入肌肉和关节。正常的血液凝结是血液中很多物质共同作用的结果，其中一些物质就叫凝血因子，如果一种凝血因子数量缺乏就可能发生出血时间延长现象，血友病患者的凝血因子比正常人要少。

血友病由凝血因子Ⅷ（F8）或Ⅸ（F9）基因缺陷引起，F8位于性染色体Xq28位置，大小186kb；F9位于Xq27.1~q27.2位置，大小34kb。F8，F9编码的凝血因子是血浆中的一种球蛋白，基因缺陷造成F8或F9分子合成障碍或结构异常，引起血液凝固障碍，导致全身出血倾向。

    检测内容 

血友病A：检测F8基因

●进行F8基因的编码区及剪切点的点突变检测，外显子缺失及重复突变检测；

●内含子22和内含子1倒位检测；

●患者全套检测＋母亲阳性位点验证；

血友病B：检测F9基因

●进行F9基因的编码区及剪切点的点突变检测，外显子缺失及重复突变检测

●患者全套检测＋母亲阳性位点验证；

     项目优势

    样本类型

EDTA或枸橼酸钠抗凝（避免使用肝素抗凝）外周血2ml，或口腔拭子2根。

    保存及运输

2-8℃可存放一周，更长时间需采用-20℃保存；运输需泡沫箱加冰袋密封，运输途中避免暴晒且时限不超过72小时。

    技术体系（自主开发）

★点突变检测：FastTarget富集技术＋二代测序＋Sanger测序验证

1）针对基因转录起始点上游500bp，5＇UTR，编码区，剪切点8bp内含子序列，转录终止子进行测序，采用的方法是二代测序标准＋一代测序验证；

2）二代测序数据要求：所有目标区段平均有效测序深度＞300x，所有片段测序深度＞＝20x；

3）低频功能候选突变位点或HGMD致病突变在母亲（如果有）及样本中进行一代验证。低频是指在正常个体中MAF＜1％，功能候选突变位点是指错义突变，无义突变，起始密码子突变，剪切点附近8bp之内内含子突变，插入/缺失突变，5＇UTR突变，启动子区转录起始点突变，3＇UTR中转录子终止子突变；

4）如果提供母亲样本，对于新发突变，须采用亲子鉴定对其真实性进行确证。

★外显子缺失重复突变检测：Accucopy®

1）针对所有外显子进行缺失/重复突变检测；

2）CNV阳性候选样本检测重复2次，在母亲样本存在的情况下针对发现的缺失/重复突变进行母亲检测验证；

3）如果提供母亲样本，对于新发缺失/重复突变，须采用亲子鉴定对其真实性进行确证。

★F8检测增加intron1/22倒位检测：AQ-PLP™

 检测流程

    检测周期

10个工作日。

    适用人群

     检测案例

我司贝康诺®优生优育遗传病携带者筛查项目，筛查出1例血友病基因突变女性携带者，血友病属于X连锁隐性遗传病。X连锁隐性遗传病一直有着“传男不传女”的称号，由于致病基因位于母亲的一条X染色体上，因此与完全正常的男性生育后代时，男孩将有1/2的几率成为患者，女孩仅有1/2的几率成为携带者。

该女性携带者在孕中进行产前筛查时检测出血友病F8基因大片段缺失，检测出该突变后我司对该孕妇的羊水进行检测，发现了同样的大片段缺失，即该孕妇已将突变传递给了胎儿。孕妇羊水检测具体突变信息如下：

◆受检样本F8基因杂合突变数据图：

◆正常样本数据图：

血友病（Hemophilia）是一种凝血功能障碍性疾病，由于凝血因子编码基因突变导致凝血因子功能缺陷，呈X染色体隐性遗传模式。其主要临床表现为关节、肌肉和深部组织出血，也可有胃肠道、泌尿道、中枢神经系统出血以及受伤、拔牙或手术后渗血时间延长，伤口完全愈合前出血延迟或复发等，其严重程度取决于相应凝血因子的凝血活性。 血友病又分为血友病A（甲型血友病）和血友病B (乙型血友病)。血友病A由F8基因突变引起凝血因子Ⅷ缺陷，约占血友病的80~85%，发病率为1/5000新生男婴；而血友病B由F9基因突变引起凝血因子Ⅸ缺陷所致，约占血友病的15~20%，发病率约为1/25000新生男婴。 

病例中的女性携带者F8基因出现大片段缺失突变将会引起凝血因子Ⅷ的缺陷。目前血友病的治疗仍然以输注凝血因子等方法为主，作为一种伴随终生的遗传性疾病，及时进行干预意义重大。本例女性携带者的羊水中检测出了同样类型的突变，值得庆幸的是胎儿为女性，一般只是血友病的携带者，不需要进一步采取干预措施。但该女胎长大成人，需要生育下一代时，也需进行产前诊断或选择三代试管的方式来避免血友病男性患儿的出生。若该孕妇以后想生育二胎或三胎也都需做好产前诊断，若该突变片段遗传给了男胎，为了避免较为严重血友病患儿的出生，则需要终止妊娠。另外，部分携带血友病基因突变的女性有发生异常出血的风险，因此该孕妇需尽早检测其凝血因子水平，与其产检的主治医生协商，制定最佳的分娩方案。

X连锁隐性遗传病缺乏明确的家族史，女性往往为携带者，难以察觉，通过常规的产前和孕前体检也难以检测出，一旦生育男孩那么生育患儿的几率高达1/2，因此针对X连锁隐性遗传病的孕前、产前基因检测仍需引起教育和重视。